높은 cDNA 합성 특이도

- 고온에서의 높은 활성(55 to 80℃)으로 다양한 RNA template로부터의 cDNA 합성 특이성을 개선

RapiDxFire Thermostable RT performs best at High temperatures

Figure 1. Reaction temperature profile for RapiDxFire Thermostable Reverse Transcriptase
Reverse transcription(역전사) 반응 실험은 제조사 권장 buffer system 과 Poly (rC) /p(dG)12-18 template/primer를 이용하여 ice에서 준비되었습니다. 반응 실험은 온도(37,50,55,60,65,70,75,80℃) 각각에서 40분 반응 시켜 확인하였습니다. RNA/cDNA heteroduplex product의 양을 이용하여 polymerization 활성을 측정하였고 PicoGreen® fluorescence를 이용하였습니다. 실험 결과, RapiDxFire Thermostable RT는 reaction 온도가 높아질수록 (최대 80℃까지) 높은 활성을 띄었습니다.

높은 민감도

- 2 step RT qPCR에서 ≤100 copies의 RNA 검출 가능

Superior Detection of Zika virus with RapiDxFire Thermostable RT

Figure 2. cDNA synthesis time course studies in a 2-step RT-qPCR reaction with different thermostable RTs.
A) 역전사 반응 1분 후의 qPCR 곡선.
Zika cDNA 합성은 target-specific primers와 권장 buffer 및 제조사별 권장 반응 온도 (RapiDxFire= 60⁰C, Supplier B= 50⁰C, and Supplier T= 55⁰C)를 따라 각 효소에 대해 중복 수행되었습니다. cDNA 합성 이후 real-time PCR은 cDNA 샘플 1/10 볼륨으로 진행되었습니다. PCR은 EconoTaq 과 제공되는 buffer (Lucigen Cat No. 30031-3)를 이용해 진행되었고 PCR product의 검출은 intercalating dye (Dyomics Cat No. V13-01184) 와 BioRad CFX C1000 Touch™ (absorption/emission of 481nm/526nm)를 이용하였습니다.
B) Reverse transcription time course study prior to performing second-step real-time PCR.
그래프에 표시된 데이터 부분은 A)의 qPCR curve로부터 얻은 결과입니다.

5분 이내의 짧은 반응 시간

- RT-qPCR workflow 간소화 및 빠른 결과 도출

3-month Room Temperature Stability

Figure 3. RapiDxFire Thermostable RT was stored in separate aliquots per time point at ambient and -20℃.
각 시점에서 RapiDxFire Thermostable RT는 10000 copies MS2 RNA의 first-strand cDNA 합성을 측정하여 평가하였습니다. cDNA합성은 MS2의 gene-specific primer를 이용하여 60℃, 5분 반응으로 진행하였습니다. cDNA는 real-time PCR을 이용해 측정되었고 MS2 primers는 520base pair amplicon으로 디자인 되었습니다.